適用製品
エステル結合を含む非天然タンパク質の製造方法
目的
リボソームにおける生体内翻訳系を用いて、タンパク質を構成する主鎖のペプチド結合を効率的にエステル結合に置換する。
効果
タンパク質の所望の位置で、ｐＨ依存的に切断されるタグの調製等に応用することができる。またタンパク質の立体構造をアミド結合では達成できない新しい構造へと改変することが可能である。遺伝情報に基づいてエステル結合を導入することができるため、遺伝的スクリーニング法により、特定の活性をもつエステル結合導入ポリペプチドを選択することができる。
技術概要
ポリペプチド主鎖に少なくとも１つのエステル結合を含む非天然タンパク質の製造方法であって、
（ａ）α−ヒドロキシ酸を活性化しうるアミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素と、
（ｂ）前記アミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素の存在下において前記α−ヒドロキシ酸と結合可能なサプレッサーｔＲＮＡと、
（ｃ）所望の位置にナンセンス変異又はフレームシフト変異を受けた所望のタンパク質をコードする遺伝子と、
を前記α−ヒドロキシ酸の存在下に細胞内又は細胞抽出液内で発現させることを特徴とし、
前記アミノアシル−ｔＲＮＡ合成酵素が、ピロリジル−ｔＲＮＡ合成酵素遺伝子を持つ古細菌又は細菌由来のピロリジル−ｔＲＮＡ合成酵素又はその変異体であり、
前記変異体は、野生型ピロリジル−ｔＲＮＡ合成酵素のＣ末端側ドメインにおけるクラス−ＩＩａａＲＳに特徴的な７個のアンチパラレルβ−シートを構成するアミノ酸配列から選択される少なくとも１つのアミノ酸残基が別のアミノ酸残基に置換される変異のみを持つ、
非天然タンパク質の製造方法。
基本情報
開放特許情報
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