適用製品
標的ＤＮＡに変異が導入された植物細胞、該植物細胞を含む植物体、並びに該植物体の子孫、クローン及び繁殖材料
目的
標的ＤＮＡのみならず、該ＤＮＡ以外の領域にも、マーカー遺伝子等の不要な配列を残すことなく、必要な変異のみが標的ＤＮＡに導入された植物細胞の製造方法を提供すること。
効果
植物細胞において、相同組換えによりゲノムＤＮＡ内に挿入された不要な配列を、ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンごと痕跡残すことなく除去できる。しかも、その効率は９０％以上と顕著に高く、さらにｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゼースにより切り出されたｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゾンがゲノムＤＮＡに再挿入される率は１％と極めて低い。したがって、本発明によれば、植物細胞において、標的ＤＮＡのみならず、該ＤＮＡ以外の領域にも、マーカー遺伝子等の不要な配列を残すことなく、必要な変異のみを標的ＤＮＡに導入することが可能となる。
技術概要
図１に示す系を実際に構築し、その有効性を検証した。その結果、植物細胞において、相同組換えによりゲノムＤＮＡ内に挿入された不要な配列（マーカー遺伝子）をｐｉｇｇｙＢａｃの利用により痕跡残すことなく除去できることが初めて明らかになった。しかも、その効率は９０％以上であり、哺乳動物におけるそれや植物細胞においてランダムにゲノムＤＮＡ内に挿入されたｐｉｇｇｙＢａｃを除去する効率（非特許文献１〜５ 参照）と比して、顕著に高いものであった。さらに、これら文献において開示されている従前の系においては、ｐｉｇｇｙＢａｃトランスポゼースにより切り出されたｐｉｇｇｙＢａｃがゲノムＤＮＡに再挿入される率は、哺乳動物の系においては約７０％、従前の植物の系においては約４０％と高いのに対して、驚くべきことに、図１に示す系におけるそれは１％と極めて低いものであることを見出し、本発明を完成するに至った。
基本情報
開放特許情報
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登録者情報
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