目的
高耐熱性で、ＤＮＡ鎖伸長の校正機能である３＇－５＇エキソヌクレアーゼ活性を有し、かつプライマー伸長活性が強いＤＮＡポリメラーゼを使用するとともに、高塩濃度下においても高いＤＮＡポリメラーゼ活性を発揮することが可能な、新たなＤＮＡポリメラーゼ反応系を構築する点にあり、サンプルの前処理なしで、高塩濃度下であろうと数Ｍｂの長いＤＮＡ領域を短時間で複製可能な新規技術を提供する。
効果
パイロコッカス・ホリコシ由来の新規二つのＤＮＡ複製因子、すなわち、クランプとクランプローダーが提供でき、これにより、高温、高塩環境下で、長鎖ＤＮＡを高速かつ正確に複製するＤＮＡポリメラーゼの酵素反応系が構築可能となり、酵素反応系は、Ｌｏｎｇ－ＰＣＲ等に特に有用であり、また、酵素反応系を用いた遺伝子配列解析に関する新手法の開発が可能になる。
技術概要
デオキシヌクレオチド三リン酸を酵素基質として、ＤＮＡポリメラーゼによりプライマーＤＮＡを伸長させて、鋳型ＤＮＡと相補のＤＮＡを合成する方法であって、酵素反応系が、パイロコッカス・ホリコシ由来のＤＮＡポリメラーゼを有し、３分子のサブユニットからなり、かつ、クランプ機能を有するタンパク質複合体であって、サブユニットが配列番号８に示されるアミノ酸配列を有するか、あるいはアミノ酸配列において、１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列を有するタンパク質からなる、タンパク質複合体を含む。さらに、この方法は、大サブユニット１分子と小サブユニット４分子からなり、かつ、クランプローダー機能を有するタンパク質複合体であって、大サブユニットが配列番号１０に示されるアミノ酸配列を有するか、あるいはアミノ酸配列において、１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列を有するタンパク質であり、小サブユニットが配列番号１４に示されるアミノ酸配列を有するか、あるいは該アミノ酸配列において、１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたアミノ酸配列を有するタンパク質からなる、タンパク質複合体を含む。
基本情報
開放特許情報
登録者情報
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